Мульти

Блог

ДомДом / Блог / Мульти

Jun 23, 2023

Мульти

Nature Plants (2023)Цитировать эту статью 6589 Доступов 96 Подробности Altmetric Metrics Nicotiana benthamiana — бесценное модельное растение и биотехнологическая платформа с аллотетраплоидным геномом ~3 ГБ. К

Природные растения (2023)Цитировать эту статью

6589 Доступов

96 Альтметрика

Подробности о метриках

Nicotiana benthamiana — бесценное модельное растение и биотехнологическая платформа с аллотетраплоидным геномом размером ~3 Гб. Чтобы еще больше повысить его полезность и универсальность, мы создали высококачественные сборки генома на уровне хромосом в сочетании с наборами данных транскриптома, эпигенома, микроРНК и мобильных элементов для повсеместно используемого штамма LAB и родственного дикого образца QLD. Кроме того, карты однонуклеотидного полиморфизма были составлены еще для двух лабораторных штаммов и четырех диких образцов. Несмотря на потерю пяти хромосом из предкового тетраплоида, расширение межгенных областей, широко распространенную сегментную аллополиплоидию, продвинутую диплоидизацию и свидетельства недавних всплесков подвижности псевдовируса Copia (Copia), не наблюдаемых в других геномах Nicotiana, два субгенома N. benthamiana демонстрируют большие размеры. области синтении у пасленовых. LAB и QLD имеют множество генетических, метаболических и фенотипических различий, включая несопоставимые реакции РНК-интерференции, но они в высокой степени интерферильны и поддаются редактированию генома, а также как временной, так и стабильной трансформации. Комбинация LAB/QLD может оказаться столь же полезной, как партнерство Columbia-0/Landsberg errecta, используемое с первых дней новаторской геномики Arabidopsis до сегодняшнего дня.

Род Nicotiana, насчитывающий около 75 видов, преимущественно эндемичен для Северной и Южной Америки и Австралии1. Как и большинство пасленовых, его основное число хромосом равно 12, а содержание гаплоидной ДНК варьируется от 1,37 до 6,27 Гб (ссылка 2). Секция Suaveolentes (приятно пахнущая) включает N. benthamiana и представляет собой крупнейшую группу аллотетраплоидов в роде (~35 видов) с числом хромосом от 15 до 24, что является диагностическим признаком события аллотетраплодизации с последующей потерей хромосом3,4,5 (рис. 1a). ). Почти все виды в этом разделе являются аборигенами Австралазии, которую они, по-видимому, колонизировали во время плиоценового перехода ~ 5–6 миллионов лет назад (млн лет назад). Диплоидные предки N. benthamiana, скорее всего, принадлежали к секциям Sylvestres и Noctiflorae, чьими ближайшими секвенированными современными родственниками являются N. sylvestris (~2,6 Гб) и N. glauca (~3,2 Гб)6,7,8,9,10, 11 соответственно.

а, Предполагаемая филогения и происхождение секции Suaveolentes по сравнению с другими Nicotianas. Номера хромосом указаны для каждого вида Suaveolentes. Виды, отмеченные звездочкой, являются современными родственниками предполагаемых родителей N. benthamiana и N. tabacum. б — Распространение N. benthamiana в Австралии (клетчатые регионы). Физическое местоположение изолированных образцов N. benthamiana, о которых сообщалось в этом исследовании, показано булавками, а традиционные торговые маршруты коренных народов показаны красными линиями. c, Профили среднего выброса отдельных летучих соединений цветков из LAB и QLD за 24-часовой период. Темно-синий, бензиловый спирт. Для других соединений см. расширенные данные на рис. 1. Данные представлены в виде среднего ± sem (n = 4 на точку выборки). г — продукция антоцианов через 5 дней после временной экспрессии AN-подобного MYB в LAB и QLD; правые панели показывают протопласты, изолированные из инфильтрированных участков LAB и QLD (n = 5). Масштабная линейка, 50 мкм. д, Сравнение накопления никотина и норникотина в цветках и листьях LAB и QLD. Биохимическое превращение никотина в норникотин, опосредованное деметилазой CYP82E (расширенные данные, рис. 9), показано справа. Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка (n = 4). е, Сравнение накопления HGL-DTG в цветках и листьях LAB и QLD. Схематический биохимический путь показан справа. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение (n = 4).

N. benthamiana является очень важной растительной платформой для производства биофармацевтических белков и вакцин7,12 и сыграла важную роль в фундаментальных открытиях в области РНК-интерференции (РНКи), взаимодействия растений и патогенов, инженерии метаболических путей, функциональной геномики, синтетической биологии и редактирования генов13. Вся эта работа основывалась на растениях, полученных из одного образца, который мы называем LAB, который, по-видимому, произошел из единственной коллекции возле золотого рудника Гранитс в центральной Австралии7,14,15 (рис. 1b). Недавно было описано несколько дополнительных образцов7,14,15,16.

95%) as tomato, eggplant, potato and pepper./p> ’. The bioinformatic analyses were performed at the High-Performance Computing (HPC) facility, QUT, and on Flashlite on QRIScloud, Australia./p>

EDTA.pl-genome -species others -step all -u -sensitive 0 -anno 1 -threads 48./p>99.9% for all replicates (three replicates from each LAB and QLD). The cytosine methylation level was calculated using the bismark_methylation_extractor in Bismark (v.0.19.0). The methylation ratio of cytosine was calculated as the number of methylated cytosines divided by the number of reads covering that position./p>0.5 TPM was used for downstream analysis. Values of this combined analysis were used to determine the relative expression of homeologues. The homoeologous pairs were defined as expressed when the sum of the a and b subgenome homeologues was >0.5 TPM. This filtration included duplicate pairs in which only a single homeologue was expressed. To standardize the relative expression of homeologues, the absolute TPM for each gene within the duplicate pair was normalized as follows. A and B represent the genes corresponding to the A and B homeologues in pairs./p>95%) and >50% coverage were identified as integrated T-DNA in the plant genome. For the stable transformation analysis, leaf tissues were collected from 5-week-old N. benthamiana stable transgenic independent lines generated using pFN117 (Cas9) and pUQC-GFP-(218). Genomic DNA was extracted following the cetyltrimethylammonium bromide method. Nested, insertion-specific primers for the right borders (RB1, RB2 and RB3 RB2 and RB3; Table 2) of pFN117 and pUQC-GFP-(218)-A were designed. Arbitrary degenerate primers and the high-throughput thermal asymmetric interlaced polymerase chain reaction (ht-TAIL-PCR) program were as described by Singer and Burke93. Purified PCR products were directly Sanger sequenced using RB3 primer, and the insertion sites were identified through a BLASTn search against the N. benthamiana genome. The number of stable and transient T-DNA insertion sites that intersect gene body, promoter, terminator and TEs were determined using the bedtools Intersect tool (v.2.30.0)92 and the length to the closest gene from the insertion site was calculated using RnaChipIntegrator (v.1.1.0) (https://github.com/fls-bioinformatics-core/RnaChipIntegrator). The z-score test for two population proportions was used to determine the significant difference between 10 kb, 10–20 kb, 20–30 kb and 30–40 kb intervals from all stable, transient transgene insertion sites and randomly selected sites in the N. benthamiana genome./p>

15kbp and surrounding syntenic genes in are shown in orange, purple, yellow and brown. Orthology/homology relationships are indicated by coloured shading. In (B), distances between genes indicated (black text)< 50kbp; (red text) >50kbp. TE annotation tracks for LAB and QLD were prepared using annotation data from the EDTA TE annotation pipeline (see online Methods) and Geneious Prime software (Geneious Prime 2023.0.1; https://www.geneious.com). Only LTR-transposable elements are shown. Yellow blocks represent GYPSY elements and green blocks represent COPIA elements. The size of each block is proportional to the number of base-pairs annotated for that element. Red triangles represent LTR repeat regions that flank either a GYPSY or COPIA element. These elements are likely to be nearly complete and can be considered possible autonomous elements. The rectangular red blocks flank unknown LTR-TE elements. Unknown TEs are elements that are recognized as an LTR element but are not able to be classified as either a COPIA or GYPSY element due to irregularities in internal sequences for that element. These are likely to represent non-autonomous elements. Those elements not flanked by LTR sequences are highly fragmented nonfunctional elements. The blue rectangular boxes highlight the location of the genes annotated in the tracks above and below the TE annotation tracks./p>